fa کلونینگ و بیان نواحی آنتیژنیک ژن CagA هلیکوباکتر پیلوری در باکتری اشرشیاکلی بیوتکنولوژی پزشکی Medical Biotechnology پژوهشي Research <p><strong>زمینه و هدف:</strong> هلیکوباکتر پیلوری شایع ترین پاتوژن گوارشی است که نیمی از مردم دنیا را آلوده ساخته و مهمترین علت بیماریهای معدهای-رودهای از جمله گاستریک مزمن، زخم معده و دوازدهه، سرطان معده و لنفوما است. ژن CagA )سیتوتوکسین مرتبط با ژن A ( یکی از مهمترین شاخصهای بیماری زای این باکتری است. هدف از این تحقیق ساخت ناقل نوترکیب حامل نواحی آنتیژنیک ژن CagA و بیان آن در میزبان بیانی میباشد.<br> <strong>مواد و روشها: </strong>برای رسیدن به این هدف بر اساس برنامههای بیوانفورماتیکی ناحیهای از ژن CagA که دارای بالاترین خاصیت آنتیژنیک بود شناسایی شده و بر اساس آن قطعهای به طول 996 جفت باز با استفاده از روش PCR تکثیر شد. این قطعه با استفاده از هضم آنزیمی در ناقل pET32a کلون و سپس به داخل باکتری E.coli سویه BL2I(DE3) ترنسفورم و بیان گردید.<br> <strong>نتایج:</strong> نتایج توالی یابی کلونینگ موفق ژن CagA را در حامل بیانی نشان داد. وزن مولکولی پروتئین نوترکیب تولید شده بر روی ژل SDS-PAGE ، 57 کیلو دالتون بر آورد شد و صحت بیان پروتئین تایید گردید.<br> <strong>نتیجه گیری:</strong> بر اساس نتایج این مطالعه کلونینگ ناحیه اپی توپی مورد نظر با موفقیت انجام شده و احتمالا میتوان پروتئین نو ترکیب به دست آمده را به عنوان کاندیدای مناسبی برای تولید IgY حاصل از مرغهای ایمن شده برای کنترل عفونت هلیکوباکتر پیلوری در انسان، طراحی کیتهای تشخیصی و تولید واکسن هلیکوباکترپیلوری معرفی نمود .</p> <p><strong>Background & Objective: </strong>Helicobacter pylori, which has infected about 50 percent of the world population, is one of the most common gastrointestinal pathogens and the most prevalent cause of gastro-intestinal diseases, such as chronic gastric ulcers, gastric and duodenal ulcers, gastric cancer and lymphoma. The CagA Gene (cytotoxin-associated gene A) is a major virulence factor of this pathogenic bacterium. The aim of this study was to construct a recombinant vector carrying the antigenic regions of CagA gene and also to express this gene.<br> <strong>Material & methods:</strong> The major epitopes of the CagA gene were identified based on bioinformatics. Through this procedure, a gene fragment of 996 bp was isolated by PCR, inserted into a pET32a vector using the enzymatic digestion and then transformed into the E. coli strain BL2I (DE3).<br> <strong>Results: </strong>The results of sequencing represented the successful cloning of the CagA gene in the expression vector and introducing the accessibility to the antigen. The molecular weight of the produced recombinant protein was estimated 57 KD on an SDS-PAGE gel and the accuracy of the protein expression was verified.<br> <strong>Conclusions: </strong>The results of this study proved the successful cloning of the epitope area. The recombinant protein can probably be introduced as a good candidate for the production of IgY from the chickenimmunized and the control of Helicobacter pylori infection in humans. It could also be possibly used for the design of diagnostic kits and vaccines for Helicobacter pylori</p> هلیکوباکتر پیلوری, ناحیه آنتی ژنیک , CagA, پروتئین نوترکیب Helicobacter pylori, CagA, Recombinant protein 113 119 http://jabs.fums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-947-1&slc_lang=fa&sid=1 Mahdye Maleki مهدیه مالکی Maleki.mm64@gmail.com 0651988225 100319475328460010467 No Animal Science Department, College of Agriculture, Ferdowsi university of Mashhad, Mashhad, Iran گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی ،دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران. Mohammad Reza Nassiri محمد رضا نصیری nassiryr@um.ac.ir 0932998070 100319475328460010468 Yes Animal Science Department, College of Agriculture, Ferdowsi university of Mashhad, Mashhad, Iran گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی ،دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران. Mojtaba Tahmoores pour3 مجتبی طهمورث پور M_Tahmoorespur@yahoo.com 1280269766 100319475328460010469 No Animal Science Department, College of Agriculture, Ferdowsi university of Mashhad, Mashhad, Iran گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی ،دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران. Kiyarash Qazvini کیارش قزوینی Kiarash_ghazvini@yahoo.com 0937801852 100319475328460010470 No Department of Microbiology, School of Medicine, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad, Iran گروه میکروب شناسی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران.