fa کلون، بیان و تخلیص پروتئین سطحی 36 کیلو دالتونی نوترکیب(Omp2b) بروسلا آبورتوس بيولوژي سلولی-مولكولي Cellular-Molecular Biology پژوهشي Research <p><strong>زمینه و هدف:</strong> بروسلوز یکی از مهم‌ترین بیماری‌های زئونوز بوده که منجر به ضررهای اقتصادی فراوانی می‌شود. گونه بروسلا، باکتری‌های کوکوباسیل گرم منفی داخل سلولی هستند که قادر به تکثیر در فاگوزوم های ماکروفاژها می‌باشند و در بسیاری از گونه‌های حیوانی و انسان‌ها بیماری ایجاد می‌کنند. پیشگیری و تشخیص، هر دو لازمه ریشه کنی این بیماری می‌باشند. شناسایی و ارزیابی آنتی ژن‌های متفاوت سلول بروسلا در پیشبرد برنامه‌های پیشگیری و تشخیص نقش کلیدی دارند. در این تحقیق تولید و تخلیص پروتئین غشای خارجی 36 کیلو دالتونی نوترکیب (Omp2b) بروسلا آبورتوس به انجام رسید. </p><p><strong>مواد و روش‌ها:</strong> ژن پروتئین غشای خارجی 36 کیلو دالتونی بروسلا آبورتوس توسط آنزیم PrimeSTAR® HS DNA polymerase تقویت و در pJET1.2 کلون و ژن هدف در (+)pET28a ساب کلون شد. pET28a نوترکیب در E.coli BL21 (DE3) ترانسفورم شد. بیان پروتئین نوترکیب با استفاده از 1 میلی مولار IPTG القا و پروتئین‌های حاصله توسط وسترن بلات بررسی شدند و Omp2b نوترکیب توسط آنتی سرم خرگوشی بروسلا ردیابی شدند. </p><p><strong>نتایج:</strong> ظهور باند قهوه‌ای-طلایی در جایگاه واکنش در وسترن بلات تأییدی بر کلون و بیان موفقیت آمیز بود. ما با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی، Omp2b نوترکیب را تخلیص کردیم که این روش پروتئین‌های ریفولد شده را بر روی ستون فراهم کرد. </p><p><strong>نتیجه گیری:</strong> Omp2b با موفقیت کلون، بیان و تخلیص شد. پروتئین‌های نوترکیب توسط آنتی سرم پلی کلونال شناسایی شدند که این امر صحت پروسه را تأیید می‌کند. </p> <p><strong>Background & Objective:</strong> Brucellosis is an important zoonotic disease of economic significance. Brucella species are gram-negative, facultative intracellular bacteria, and are capable of replicating in the phagosomes of macrophages. They cause infection in several animal species and humans. Prevention of new diseases and diagnosis of cases infected with the organism are both essential for eradication of the disease. Characterization and evaluation of different antigens of Brucella cells has a key role in progression of prevention and diagnosis programs. Here, we report the production and purification of recombinant 31kDa outer membrane protein Brucella abortus (Omp2b). </p><p><strong>Materials & Methods:</strong> Brucella abortus 36kDa outer membrane protein gene was amplified with PrimeSTAR® HS DNA polymerase, cloned in pJET1.2. The target gene was subcloned in pET28a (+). Recombinant pET28a vectors were transformed into E coli BL21 (DE3). Expression of recombinant protein was induced with 1mM IPTG. Proteins were absorbed to Ni-NTA agarose resins and Recombinant proteins were eluted with 250mM imidazol. Imidazol removed by dialysis. Proteins were assayed by Western-blotting and rOmp2b was probed by Brucella rabbit anti serum. <strong>Result:</strong> Appearance of a golden brown band at the site of reaction, in Western blotting confirmed successfully clone and expression. We purified Omp2b by affinity chromatography and this method prepared refolds proteins on the column. </p><p><strong>Conclusion:</strong> Omp2b were successfully cloned, expressed and purified. The recombinant proteins were recognized by polyclonal antiserum which suggests the accuracy of procedure. </p> بروسلا آبورتوس، کلون، بیان، Omp2b Brucella abortus, Cloning, Expression, Omp2b 19 23 http://jabs.fums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-28&slc_lang=fa&sid=1 Nazanin Behshti نازنین بهشتی 1003194753284600448 1003194753284600448 No Ashraf Mohabati Mobarez اشرف محبتی مبارز mmmobarez@modares.ac.ir 1003194753284600449 1003194753284600449 Yes Bahman Tabaraie بهمن تبرایی 1003194753284600450 1003194753284600450 No Bahman Tabaraie بهمن تبرایی 1003194753284600451 1003194753284600451 No Nima Khoramabadi نیما خرم آبادی 1003194753284600452 1003194753284600452 No Haniyeh Aghababa هانیه آقا بابا 1003194753284600453 1003194753284600453 No Amir Bakhtyiari امیر بختیاری 1003194753284600454 1003194753284600454 No