fa کلونینگ و بیان آنتی‌ژن LipL32 لپتوسپیرائی به عنوان کاندیدی برای تشخیص سریع بیماری بيولوژي سلولی-مولكولي Cellular-Molecular Biology پژوهشي Research <b>زمینه و هدف: </b>یکی از مشکلات اصلی در بیماری لپتوسپیروزیس، دشواری تشخیص آن است که باعث شده این بیماری به عنوان یک چالش در سلامت انسان و دام مطرح باشد. با توجه به مشکلات موجود در آزمون آگلوتیناسیون میکروسکوپی (MAT) که روش معمول در تشخیص این عفونت است، تلاش‌های فراونی در جهت طراحی و اجرای روش‌های دقیق و سریع تشخیصی انجام شده است. با توجه به این که پروتئین غشای خارجیLipL32 می‌تواند به عنوان کاندید مناسبی برای مصارف تشخیصی محسوب شوند، در این مطالعه قصد بر این است که این آنتی‌ژن را کلون و بیان نماییم. <br><b>مواد و روش‌ها: </b>ابتدا ژن LipL32 بوسیله پرایمرهای اختصاصی و روش PCR تکثیر گردید و سپس در داخل وکتور بیانی pQE30 کلون گردید و با استفاده از آزمون‌های کنترلی جهت قرار‌گیری قطعه مربوطه مورد تایید قرار گرفت. برای بیان پروتئین مورد نظر، پلاسمید نوترکیب ایجاد شده در درون میزبان مناسب (E.coli M15)، وارد و سپس بیان شد. <br><b>نتایج:</b> پروتئین بیان شده با استفاده از آزمون الکتروفورز SDS-PAGE مورد بررسی قرار گرفت و با تکنیک وسترن بلاتینگ و استفاده از آنتی‌بادی‌های اختصاصی، تائید شد. <br><b>نتیجه گیری:</b> پروتئین نوترکیب LipL32 با موفقیت در سیستم پروکاریوتی بیان گردید. این پروتئین را می‌توان در جهت طراحی روش‌های تشخیصی در عفونت‌های ناشی از لپتوسپیرا در دام یا انسان مورد استفاده قرار داد. <b>Background and Objective:</b> Leptospirosis as an important emerging infectious zoonotic disease caused by spirochetes of the genus Leptospira. Given the low sensitivity and long duration of its culture, the diagnosis of leptospirosis is mainly based on serological methods. The microscopic agglutination test (MAT) is considered as the reference method. Because of the complexity of the MAT, there is an urgent need for the development of new reliable and rapid screening tests for leptospirosis. Major leptospiral outer membrane proteins (OMPs), present only in pathologic strains, could be regarded as a good candidate for diagnostic studies. Here we report the cloning and expression of LipL32, as a prominent immunogenic protein, in a prokaryotic system. <br> <b>Materials and Methods:</b> After the amplification of LipL32 gene, it was cloned into the pQE30 vector. The insertion of LipL32 gene into the vector was screened and confirmed with restriction analysis and sequencing. The recombinant plasmid was transformed into E. coli M15 strain, and the expressed protein was identified by SDS-PAGE and western blotting. This recombinant protein with 6× His-tagged sequence was purified using Ni-NTA affinity column chromatography. <br><b>Results: </b>The results revealed that the selected gene was successfully cloned in pQE30 vector and recombinant protein (rLipL32) of approximately ~32 kDa was produced, purified and confirmed by western blotting. <br> <b>Conclusion: </b>This recombinant protein could be potentially used for the development of serodiagnosis tests for the diagnosis of leptospirosis in humans and animals. لپتوسپیروزیس، پروتئین نوترکیب، آنتی‌ژن LipL32 ، کلونینگ، بیان پروتئین Leptospirosis, Recombinant Protein, Cloning, LipL32, Protein expression 124 129 http://jabs.fums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-35-1&slc_lang=fa&sid=1 Nooshin Sohrabi نوشین سهرابی nsohrabi75@yahoo.com 10031947532846002867 10031947532846002867 Yes Payam-e-Noor University دانشگاه پیام نور Shohreh Azimi شهره عظیمی 10031947532846002868 10031947532846002868 No Islamic Azad Universit دانشگاه آزاد اسلامی- واحدکرج