fa جداسازی و تخلیص آنزیم ال آسپاراژیناز از جدایه‌های استرپتومایسس خلیج‌فارس و بررسی بیان ژن کلون شده آن در باکتری اشریشیاکلی با Real-time و SDS-PAGE ميكروبیولوژی Microbiology پژوهشي Research <div style="text-align: justify;"><strong><span style="font-family:B Nazanin;">زمینه و هدف:</span></strong><span style="font-family:B Nazanin;"> آنزیم ال آسپارژیناز کاربرد مؤثر در درمان سرطان لوسمی لنفوبلاستیک دارد. این آنزیم از منابع باکتریایی جداشده و به‌صورت تجاری به‌عنوان داروی ضد سرطان عرضه می‌شود. هدف از این پژوهش جداسازی و تخلیص آنزیم ال آسپاراژیناز از جدایه‌های <em>استرپتومایسس</em> خلیج‌فارس و بررسی بیان ژن کلون شده آن در باکتری <em>اشریشیاکلی</em> با </span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">Real-time</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"> و </span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">SDS-PAGE</span></span> <span style="font-family:B Nazanin;">است.</span><br> <strong><span style="font-family:B Nazanin;">مواد و روش‌ها:</span></strong><span style="font-family:B Nazanin;"> جدایه‌های جنس <em>استرپتومایسس</em> از خلیج‌فارس جداسازی و توسط تست‌های بیوشیمیایی تعیین هویت شدند و سپس با روش واکنش زنجیره‌ای پلیمراز</span> <span style="font-family:B Nazanin;">ژن ال آسپارژیناز از این <em>استرپتومایسس</em>‌ها جدا گردید. قطعه تکثیر یافته توسط روش </span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">TA</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"> کلونینگ به داخل وکتور بیانی </span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">pTG19</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"> وارد شد. در مرحله بعد وکتور نوترکیب با روش شوک با </span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">CaCl₂</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"> به باکتری <em>اشریشیاکلی</em> ترانسفورم شد و با استفاده از روش‌های رایج تائید کلونینگ انجام گردید.</span><br> <strong><span style="font-family:B Nazanin;">نتایج:</span></strong><span style="font-family:B Nazanin;"> نتایج این پژوهش نشان داد که <em>استرپتومایسس</em>‌های جداشده از خلیج‌فارس قادر به تولید آنزیم ال آسپارژیناز می‌باشند. درنهایت ژن این آنزیم توسط وکتور با موفقیت به باکتری <em>اشریشیاکلی</em> ترانسفورم شد و با بازدهی بالا، آنزیم ال آسپاراژیناز تولید نمود.</span><strong><span style="font-family:B Nazanin;">نتیجه‌گیری:</span></strong><span style="font-family:B Nazanin;"> پیدا کردن سویه‌های باکتریایی جدید تولیدکننده آنزیم ال آسپاراژیناز </span><span style="font-family:IRANyekanlight;">و استفاده تکنیک مهندسی ژن می‌تواند منجر به عملکرد بهتر این آنزیم‌ها شود و به‌وسیله آن گام بزرگی در مسیر افزایش و سهولت تولید ال آسپاراژیناز در صنعت داروسازی برداشت</span>.</div> <div style="text-align: justify;"><strong><em>Background & Objective</em></strong><em>:</em> Asparaginase enzymes are effective in treating lymphoblastic leukemia cancer. This enzyme is isolated from bacterial sources and commercially available as an anticancer drug. The aim of this study was to isolate and purifiy L-asparaginase from persian gulf Streptomyces isolates and evaluate its cloned gene expression in E. coli by Real-Time and SDS-PAGE.<br> <strong><em>Materials & methods:</em></strong> Streptomyces isolates were isolated from the Persian Gulf and identified by biochemical tests, then, L-asparaginase genes were isolated from streptomyces by PCR method. The amplified fragment was entered into vector pTG19 by the TA cloning technique. In the next step, the recombinant vector was transformed into E. coli using CaCl₂ method and cloning confirmation using conventional methods.<br> <strong><em>Result:</em></strong> The results of this study showed that Streptomyces isolates from the Persian Gulf were capable of producing L-asparaginase. Eventually, the gene of this enzyme was successfully transformed to E. coli by vector and produced high efficiency L-asparaginase.<br> <strong><em>Conclusion: </em></strong>Finding new bacterial strains producing L-asparaginase and using gene engineering techniques can lead to better performance of these enzymes, thereby taking a big step in the direction of increasing and facilitating the production of L-asparaginase in the pharmaceutical industry.<br> &nbsp;<br> <br> <strong><em><span dir="RTL"></span></em></strong></div> ال-آسپارژیناز, استرپتومایسس, لوکمی لنفوبلاستیک L-Asparaginase, Streptomyces, Lymphoblastic Leukemia 2558 2566 http://jabs.fums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2469-1&slc_lang=fa&sid=1 Hadiseh Soofer حدیثه سوفر majidtaati1367@gmail.com 2599999995 100319475328460023003 No Department of Biochemistry, Faculty of Advanced Science and Technology, Tehran Medical Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran گروه بیوشیمی، دانشکده علوم و فناوری‌های نوین، دانشگاه علوم پزشکی آزاد اسلامی تهران، تهران، ایران Kumarss Amini کیومرث امینی dr_kumarss-amini@yahoo.com 2599889995 100319475328460023004 Yes Department of Microbiology, Faculty of Basic Sciences, Saveh Branch, Islamic azad university, Saveh, Iran گروه میکروبیولوژی، دانشگاه علوم پایه، واحد ساوه، دانشگاه آزاد اسلامی، ساوه، ایران Seyed Mohammad Masoud Shushtarian سید محمد مسعود شوشتریان majidtaati1367@gmail.com 2593636452 100319475328460023005 No Department of Biophysics & Biochemistry, Faculty of Advanced Science and Technology, Tehran Medical Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran گروه بیوشیمی و بیوفیزیک، دانشکده علوم و فناوری‌های نوین، دانشگاه علوم پزشکی آزاد اسلامی تهران، تهران، ایران