en اثر سایتوتوکسیک فراگاسیاتوکسین C نوترکیب روی سلول های تک هسته ای خون محیطی(مقاله انگلیسی) انكولوژي Oncology پژوهشي Research <div style="text-align: justify;"><strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">زمینه و هدف:</span></span></strong> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">اکتینوپورین ها پروتئین ها و پپتیدهای سیتولیتک هستند که</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> توسط شقایق دریایی تولید می شوند و</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> باعث تشکیل منفذ در غشای لیپیدی می شوند. فراگاسیاتوکسین</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;"> C </span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">یکی از اعضای این خانواده با وزن مولکولی 20 کیلودالتون می باشد که به طور خاص</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> به اسفنگومیلین در غشای پلاسما</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">یی متصل و منافذ کاتیونی انتخابی به قطر دو نانومتر را در غشا تشکیل می دهد</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">.</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> هدف اصلی از این مطالعه &nbsp;بررسی فعالیت زیستی سم روی سلول های تک هسته ای خون محیطی</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">(PBMCs)</span></span> &nbsp;<span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">می باشد.</span></span><br> <strong><span style="color:black;"><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">مواد و روش ها:</span></span></span></strong> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">وکتور بیانی</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;"> pET28a </span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">دربرگیرنده توالی کد کننده</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;"> FraC </span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">به سلول مستعد اشرشیا کلی سویه</span></span> &nbsp;<span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">BL21</span></span> &nbsp;<span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">ترانسفورم گردید. سپس تخلیص پروتئین بوسیله کروماتوگرافی تمایلی انجام شد. تخلیص پروتئین توسط <em><span style="font-family:B Nazanin;">الکتروفورز</span></em> <em><span style="font-family:B Nazanin;">ژل پلی آکریل آمید تایید شد. </span></em>غلظت های مختلف از سم روی سلول های قرمز خون (</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">RBC</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">) تست شد و فعالیت همولیزی آن، با ثبت در طول موج 700 نانومتر آنالیز شد.</span></span> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">به منظور بررسی فعالیت ضدسلولی سم تخلیص شده، </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">PBMCs</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> با استفاده ازغلظت های متفاوت سم مورد تیمار قرار گرفتند</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">.</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> فعالیت سیتولیتیک پروتئین</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">&nbsp;&nbsp; FraC </span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">روی سلول های تک هسته ای خون محیطی با استفاده از روش</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;"> ) </span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">دی متیل تیازول</span></span><span style="font-size:10.0pt;">&ndash;</span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> دی فنیل تترازولیوم بروماید</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">(MTT&nbsp; </span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">و نوترال رد سنجیده شد.</span></span><br> <strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">نتایج:</span></span></strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> ارزیابی فعالیت همولیتیک نشان داد سم در تمام مراحل تخلیص فعالیت خود را حفظ می کند. نتایج بررسی فعالیت سیتولیتیک روی</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;"> PBMCs </span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">نشان می دهد در غلظت های پایین</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">FraC </span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">، نسبت زنده مانی سلولها به گروه شاهد تغییر معنی داری نیافته است. فعالیت متابولیکی</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;"> PBMCs </span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">&nbsp;فقط در غلظت های بالاتر توکسین (800 و 1000 نانومولار) به طور قابل توجهی کاهش یافت</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">. با توجه به نتایج تست تریپان بلو، داده های حاصل از روش نوترال رد نشان داد</span></span> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">با افزایش غلظت سم، سنجش جذب نوترال رد در</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;"> PBMCs </span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">به طور قابل توجهی کاهش می یابد</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">.</span></span><br> <strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">نتیجه گیری:</span></span></strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> با وجود فعالیت ضد سلولی سم روی</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">RBC </span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">،</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;">FraC </span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">&nbsp;در غلظت های پایین دارای فعالیت سایتوتوکسیک روی سلولهای تک هسته ای خون محیطی نمی باشد.</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:10.0pt;"></span></span><br> <br> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"></span></span></div> <div style="text-align: justify;"><strong><em>Background & Objectives</em></strong><em>:</em> Actinoporins from sea anemones are potent pore-forming toxins. <em>Fragaceatoxin C</em> belongs to this family with a molecular weight of 20 kDa that mainly binds sphingomyelin in membranes and forming 2nm in diameter cation-selective pore. The aim of this study was the examination of recombinant toxin activity against peripheral blood mononuclear cells (PBMCs).<br> <strong><em>Material & Methods:</em></strong> For recombinant expression of toxin, <em>E.coli Bl21</em> was employed. The toxin purified by Ni^{<span dir="RTL">2</span>}⁺-NTA Sepharose affinity chromatography. The purity of toxin was confirmed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis <span dir="RTL">)</span> SDS-PAGE<span dir="RTL">(</span>. Various dilutions of the toxin were applied on red blood cells, and their hemolytic activity was analyzed by spectrophotometer by recording OD7<span dir="RTL">0</span>0. To examine the cytotoxic activity of purified toxin, PBMCs were treated with its different concentration. Cytolytic activity of FraC protein on PBMCs was measured using MTT and neutral red uptake assays.<br> <strong><em>Results:</em></strong> Hemolytic assessment indicated that the toxin had retained its activity after purification. Analysis of PBMCs tests showed that low doses of toxin did not change the viability of cells compared to control cells. The metabolic activity of living PBMCs was only significantly decreased at the higher concentration (800 and 1000 NM) of the toxin. Despite the results of trypan blue tests, obtained data indicated that the Neutral red uptake assay was significantly reduced in PBMCs in a dose-dependent manner<span dir="RTL">.</span><br> &nbsp;<strong><em>Conclusion:</em></strong> Despite toxicity against RBCs, FraC is not toxic to the peripheral blood mononuclear cells at lower doses.</div> اکتینوپورین, فراگاسیاتوکسینC , سلول های تک هسته ای خون محیطی Actinoporins, Fragaceatoxin C, Peripheral blood mononuclear cells 2477 2486 http://jabs.fums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-490-6&slc_lang=en&sid=1 Leyla Darbarfard لیلا داربرفرد l.darbarfard@gmail.com 100319475328460022972 100319475328460022972 No Department of Cellular and Molecular Biotechnology, Institute of Biotechnology, Urmia University, Urmia, Iran گروه بیوتکنولوژی سلولی و مولکولی، پژوهشکده بیوتکنولوژی، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران Mehdi Imani مهدی ایمانی m.aimani@urmia.ac.ir 100319475328460022973 100319475328460022973 No Department of Cellular and Molecular Biotechnology, Institute of Biotechnology, Urmia University, Urmia, Iran گروه بیوتکنولوژی سلولی و مولکولی، پژوهشکده بیوتکنولوژی، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران Seyyed Meysam Abtahi Froushani سید میثم ابطحی فروشانس meysamabtahi@hotmail.com 100319475328460022974 100319475328460022974 Yes Department of Basic Sciences, Faculty of Veterinary Medicine, Urmia University, Urmia, Iran گروه علوم پایه، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران