fa طراحی کیت تشخیصی کلامیدیا تراکوماتیس در زنان علامت‌دار به روش Real time PCR ميكروبیولوژی Microbiology پژوهشي Research <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">زمینه و هدف:</span></span></strong> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">کلامیدیا تراکوماتیس یکی از شایع‌ترین علل عفونت‌های منتقلِ از راه جنسی در سراسر جهان است. غربالگری زنان برای عفونت‌های کلامیدیایی در کشورهای درحال‌توسعه به دلیل مؤثر نبودن روش‌های تشخیصی در دسترس، بسیار موردتوجه قرارگرفته است. </span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">هدف از انجام این تحقیق دستیابی به</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">روشی است که تشخیص عفونت کلامیدیا تراکوماتیس را در زنان دارای علامت سهولت ببخشد.</span></span> <div style="text-align: justify;"><strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">مواد و روش‌ها:</span></span></strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> در این مطالعه تعداد 50 نمونه بالینی</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">(واژینال) از زنان علامت‌دار جمع‌آوری شد. پس از استخراج </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">DNA</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">، توالی ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">OMP1</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">به‌عنوان ژن منتخب از بانک ژن استخراج گردید. سپس، با استفاده از نرم‌افزار </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">Mega6</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">پرایمرهای اختصاصی طراحی گشت. با نمونه‌های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">DNA</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">استخراج‌شده </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">PCR</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">گذاشته شد و صحت پرایمرهای طراحی‌شده تائید شد. به‌منظور ساخت کنترل مثبت محصول </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">PCR</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">در وکتور، کلون شد. جهت تعیین حساسیت </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">Real time PCR</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">، رقیق‌سازی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">DNA</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">از کنترل مثبت صورت گرفت و با رقت‌های مختلف </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">Real time PCR</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">گذاشته شد و همچنین جهت تعیین اختصاصیت </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">Real-time PCR</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">، </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">DNA</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">باکتری‌های ناحیه واژن استخراج و </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">Real-time PCR</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">انجام شد</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">نتایج:</span></span></strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> در این تحقیق توانستیم به‌وسیله تکنیک مولکولی پیشرفته </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">Real-time PCR</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">کیتی طراحی کنیم که دارای 10 پیکوگرم حساسیت و 100 درصد اختصاصیت در تشخیص عفونت کلامیدیایی در زنان علامت‌دار است.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">نتیجه‌گیری:</span></span></strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> با پرایمرهای طراحی‌شده و روش ریل تایم می‌توان تشخیص 100 درصد نسبت به عفونت‌های کلامیدیا داشت.</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:9.0pt;"></span></span></div> &nbsp; <div> <hr align="left" size="1" width="33%" > <div><div id="_com_1"></div></div> </div> <div style="text-align: justify;"><strong><em>Background & Objective:</em></strong> Chlamydia trachomatis is one of the most common sexually transmitted diseases worldwide. Screening women for Chlamydia trachomatis in developing countries is highly desirable due to the ineffectiveness of the available diagnostic methods. The aim of this study is to design a detection kit for Chlamydia trachomatis in symptomatic women.<br> <strong><em>Materials & Methods:</em></strong> A total of 50 clinical specimens of symptomatic women were collected. The OMP1 gene sequence was extracted from the gene bank and the primer and probe were designed appropriately by Mega6 software. The extracted DNA was amplified by PCR. In order to provide positive control, PCR product was cloned into Pjet1.2 vector. To determine the sensitivity, DNA dilution was performed. To determine the specificity, DNA of vaginal bacteria was extracted and Real Time PCR was done.<br> <strong><em>Results:</em></strong> In this study, we designed a kits with 100% specificity and 10pg/ϥl sensitivity in detecting chlamydial infection in symptomatic women<span dir="RTL">.</span><br> <strong><em>Conclusion:</em></strong> With the use of designed primers and real time, we can detect 100% of chlamydia infections.<br> &nbsp;</div> Real time PCR, کلامیدیا تراکوماتیس, OMP1 Real Time PCR, Chlamydia trachomatis, OMP1 gene 2103 2110 http://jabs.fums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1177-2&slc_lang=fa&sid=1 hamideh rouhani nejad حمیده روحانی نژاد rohaninejhad@gmail.com 100319475328460021202 100319475328460021202 Yes Malek-Ashtar University of Technology, Tehran, Iran دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران negar rahmati نگار رحمتی کیان negar_rk@yahoo.com 100319475328460021203 100319475328460021203 No Department of Microbioology, Pharmaceutical Sciences Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم دارویی، تهران، ایران fahimeh nemati mansor فهیمه نعمتی منصور 100319475328460021204 100319475328460021204 No 3. Department of biotechnology, Faculty of Science and Technologies, Pharmaceutical Sciences Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran گروه بیوتکنولوژی، دانشکده علوم و فناوری‌های نوین،، دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم دارویی، تهران، ایران darya amiri دریا امیری amiridarya97@yahoo.com 100319475328460021205 100319475328460021205 No Malek-Ashtar University of Technology, Tehran, Iran دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران