fa تشخیص کلستریدیوم دیفیسیل و بررسی توکسین‌های A و B از مبتلایان به اسهال مزمن با روش‌های کشت و PCR ميكروبیولوژی Microbiology پژوهشي Research <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">زمینه و هدف: </span></span></strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">کلستریدیوم دیفیسیل باسیل گرم مثبت، بی‌هوازی اجباری است. تشخیص دقیق و سریع یکی از مسائل مهم در کنترل عفونت کلستریدیوم دیفیسیل است. مطالعه حاضر باهدف مقایسه دو روش کشت و واکنش زنجیره‌ای پلیمراز در تشخیص کلستریدیوم دیفیسیل از بیماران مبتلابه اسهال و بررسی توکسین‌های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">A</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> و </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">B</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> در این نمونه‌ها است.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">مواد و روش‌ها: </span></span></strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">68 نمونه از بیماران بستری در بیمارستان‌های قم جمع‌آوری گردید. همه نمونه&shy;ها به‌سرعت روی محیط </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">CCFA</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> کشت و در شرایط بی‌هوازی گرما گذاری شدند. پس‌ازاین اقدامات، باکتری‌های موردنظر جهت استخراج </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">DNA</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> و سپس انجام </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">PCR</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> بر روی ژن </span></span>&nbsp;<em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">cdd3</span></span></span></em><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">جهت تشخیص قطعی باکتری به کار گرفته شد؛ محصول </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">PCR</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> آن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">622bp</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> است و برای توکسین‌های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">A</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> و </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">B</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> بایستی قطعاتی با طول 473 و 272 جفت باز گرفته شود.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">نتایج: </span></span></strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">مورفولوژی پرگنه‌&shy;های کلستریدیوم دیفیسیل بر روی محیط&shy;های مختلف بسیار متفاوت است. از مجموع 68 نمونه مدفوع استفاده‌شده، 11 کشت مثبت به دست آمد. 16 ایزوله کلستریدیوم دیفیسیل ازنظر ژن </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">cdd3</span></span></span></em><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> مثبت بودند که در 6 مورد دارای هر دو توکسین و 4 مورد دارای توکسین </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">A</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> و 3 مورد توکسین </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">B</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> را برای اساس ژن‌های مورد انتظار دارا بودند.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">نتیجه‌گیری: </span></span></strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">روش سیتوتوکسیتی به‌عنوان روش </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">gold standard</span></span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> برای این باکتری است. به‌منظور پیشگیری از شیوع بالای این باکتری، استفاده از روش‌های شناسایی بسیار مهم است که تکنیک </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">PCR</span></span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">در مقایسه با روش‌های کشت روشی مناسب برای تشخیص سریع باکتری کلستریدیوم دیفیسیل است این روش در زمان کمتری انجام‌شده و همچنین از اختصاصیت بالایی برخورداراست.</span></span><br> <br> &nbsp; <strong>Detection of Clostridium Difficile Associated Diarrhea in Disease Based on Polymerase Chain Reaction and Bacterial Culture and Toxin A, B Frequency</strong><br> <strong>Detection of Clostridium Difficile Associated Diarrhea in Disease</strong><br> <strong><em>Background & Objective:</em></strong> Clostridium difficile is an obligate anaerobic, gram positive bacillus. The purpose of this study was to comparison between PCR technique and bacterial culture for assessing the prevalence of Clostridium difficile infection in the samples of watery diarrhea.<br> <strong><em>Materials & methods:</em></strong> This cross-sectional qualitative study was performed in 68 samples of watery diarrhea in Qom province hospitals. All samples were cultured in the specialized CCFA Agar medium. Specific primers were applied for the PCR Assay based on <em>cdd3 </em>gene. Based on this primer PCR product for this gene must be 622bp.toxin A & B diagnosis based on specific primers and product must be 473 and 272 bp<br> <strong><em>Results:</em></strong> In this study, the optimized PCR technique was determined to be bacterium in 16 samples. But bacteria diagnosis in 11 samples by culture method. 6 samples have toxin A and B, 4samples has toxin A and 3 samples has toxin B.<br> <strong><em>Conclusion:</em></strong> Cytotoxicity method is gold standard for clostridium difficile. Diagnosis of these bacteria is very important and PCR was found as an applicable, sensitive, and quick technique for detection of Clostridium difficile in compromise culture medium method.<br> &nbsp; اسهال, PCR, ژن cdd3, کلستریدیوم دیفیسیل, توکسین A و B diarrhea, PCR, ccd3 gene, Clostridium difficile, toxin A, B 1596 1604 http://jabs.fums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2134-1&slc_lang=fa&sid=1 mohsen zargar محسن زرگر zmohsen2000@yahoo.com 0381229165 100319475328460019734 Yes Department of Microbiology, Qom Branch, Islamic Azad University, Qom, Iran گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد قم، قم، ایران ali javadi علی جوادی Abbasmorovvati@gmail.com 0381418138 100319475328460019735 No Department of Bacteriology, Faculty of Health, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran گروه باکتری‌شناسی پزشکی، دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران abbas morovvati عباس مروتی Abbasmorovvati@gmail.com 0386490414 100319475328460019736 No Department of Microbiology, Qom Branch, Islamic Azad University, Qom, Iran گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد قم، قم، ایران