fa تشخیص کلبسیلا پنومونیه از طریق توالی اختصاصی 16SrDNA با استفاده از تکنیک PCR-ELISA ميكروبیولوژی Microbiology پژوهشي Research <p dir="RTL"><strong>زمینه و هدف:</strong> کلبسیلا پنومونیه از اعضای خانواده‌ی انتروباکتریاسه یکی از مهم ترین عامل‌های عفونت‌های بیمارستانی می‌باشد که بعد از <span dir="LTR">Escherichia coli</span> دومین عامل باکتریمی بیمارستانی ناشی از باکتری‌های گرم منفی است. در این تحقیق هدف شناسایی این باکتری از طریق ژن اختصاصی <span dir="LTR">16SrDNA</span> با به کارگیری تکنیک <span dir="LTR">PCR-ELISA</span> می باشد<span dir="LTR">.</span></p> <p dir="RTL"><strong>مواد و روش‌ها:</strong> در این روش با استفاده از <span dir="LTR">dNTP</span> نشان‌دار شده با دیگوکسی ژنین برای تکثیر ژن اختصاصی استفاده شد. کف پلیت الایزا استرپتوآویدین بارگذاری کرده سپس با استفاده از پروب اختصاصی که قسمت ابتدای آن بیوتینه شده بود جهت اتصال به ژن تکثیر شده استفاده گردید. بیوتین متصل به پروب به استرپتوآویدین متصل شده، همچنین ژن تکثیر یافته نیز به پروب اختصاصی متصل&nbsp; شده در نهایت از آنتی بادی ضد دیگوکسی ژنین برای شناسایی محصول استفاده شد و واکنش با دستگاه نور سنج اندازه گیری شد.</p> <p dir="RTL"><strong>نتایج: </strong>با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن <span dir="LTR">16SrDNA</span> کلبسیلا پنومونیه تکثیر شد که نتیجه آن یک قطعه به طول <span dir="LTR">bp</span> 260 بود. نتایج حاصل از <span dir="LTR">PCR-ELISA</span> نشان داد که این تکنیک هیچ واکنش متقاطعی با با کتری‌های هم خانواده خود ندارد، همچنین میزان حساسیت آن 6/0 نانوگرم ارزیابی شد.</p> <p dir="RTL"><strong>نتیجه‌گیری:</strong> تکنیک <span dir="LTR">PCR-ELISA</span> روشی حساس و دقیق بوده که برای شناسایی عوامل بیماری‌زا با استفاده از ژن اختصاصی آن باکتری به کار می‌رود. این تکنیک می‌تواند جایگزین مناسبی برای تکنیک‌های زمان بر، با حساسیت کمتر و هزینه بیشتر، همچون روش‌های کشت باکتری در محیط‌های بلاد آگار و مک کانکی آگار، <span dir="LTR">Realtime PCR</span> ، تست‌های بیوشیمیایی افتراقی که امروزه در آزمایشگاه‌ها مورد استفاده قرار می‌گیرد، باشد.</p> <p><strong><em>Objective:</em></strong> <em>Klebsiella Pneumoniae</em> is one of the most important infection bacteria of the Enterobacteriaceae family. It is also the second factor of hospital bacteremia due to the gram negative bacteria after Escherichia coli. In this research, this bacteria with the private 16SrDNA gene, was identified through PCR-ELISA technique.</p> <p><strong><em>Materials and Methods:</em></strong> In this method the dNTP labeled with Digoxigenin was used for amplifying the specific gene. Streptavidin was loaded in ELISA plate, and then the specific Biotinylated probe was used to connect the Polymerase Chain Reaction (PCR) product. Biotinylated probe was connected to the streptavidin and the amplified gene was attached to the probe. Finally, the digoxigenin antibodies were used to identify the PCR product. The reaction was measured with an ELISA reader.</p> <p><strong><em>Result:</em></strong> 16SrDNA of Klebsiella pneumoniae was amplified using the gene specific primers resulted in a fragment of the bp 260. The results of PCR-ELISA showed that this technique does not cross-react with the bacteria in their families. Additionally, &nbsp;the sensitivity of 6.0 ng was evaluated.</p> <p><strong><em>Conclusion:</em></strong> In this research, PCR-ELISA technique was known as an accurate and rapid test for the detection of infection agents by using the specific gene. PCR-ELISA can act as an alternative method instead of time-consuming, less sensitive, and expensive techniques such as culture bacteria in blood agar plates, Macconkey <em>agar,</em> Realtime PCR and differential biochemical tests which are currently used in the research labs.</p> انتروباکتریاسه, کلبسیلا پنومونیه, 16SrDNA, PCR-ELISA Enterobacteriaceae, Klebsiella pneumoniae, 16SrDNA, PCR-ELISA 542 550 http://jabs.fums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-820-1&slc_lang=fa&sid=1 Fatemeh Tayebeh فاطمه طیبه 10031947532846008832 10031947532846008832 No Applied Microbiology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran. مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران. Jafar Amani جعفر امانی jafar.amani@gmail.com 10031947532846008833 10031947532846008833 Yes Applied Microbiology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran. مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران. Mehdi Moradyar مهدی مرادیار 10031947532846008834 10031947532846008834 No Department of Biology, Damghan Azad University, Damghan, Iran. گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد دامغان، دامغان، ایران. Seyed Ali Mirhossaini سید علی میر حسینی 10031947532846008835 10031947532846008835 No Applied Microbiology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran. مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران.