fa الحاق ژنی زیرواحد B سم کلرا (ctB) با زیرواحد B انتروتوکسین شیگلا دیسانتری تیپ 1 (stxB) ، همسانه سازی و بیان آن در باکتری E .coli ميكروبیولوژی Microbiology پژوهشي Research <div align="right" style="direction: rtl"><a name="up"><b>زمینه و هدف:</b> یکی از مهم‌ترین فاکتورهای بیماری‌زای اصلی در شیگلا دیسانتری تیپ 1، انتروتوکسین شیگلا یا STxمی‌باشد، که از یک زیر واحد سمی آنزیماتیک به نام STxA و یک زیر واحد پنتامریک متصل شونده به رسپتور به نام زیر واحد B یا STxB تشکیل شده است. زیر واحد STxB مسئول اتصال زیر واحد سمی به گیرنده سطح سلولی Gb3 بوده و در نهایت باعث ورود سم به درون سلول و اثرات آن می‌شود. زیر واحد B سم کلرا (CTB) به عنوان ادجوانت مخاطی قوی برای واکسیناسیون شناخته شده و همجوشی ژنتیکی آن با هترو آنتی ژن هایی مثل stxB باعث تقویت ایمنی همورال و مخاطی و پاسخ ایمنی علیه آن آنتی ژن می‌گردد. <br><b>مواد و روش‌ها:</b> در این مطالعه ژن‌های ctB و stxB پس از طراحی پرایمر به وسیله PCR تکثیر و در وکتور pGEMهمسانه‌‌سازی شدند. ژن stxB به همراه لینکر غیرفورینی به روش برش آنزیمی با ژن ctB در وکتور pGEM الحاق شدند و در نهایت قطعه کایمریکctB-stxB در وکتور بیانی pET28a(+) زیر همسانه‌سازی گردید. پروتئین کایمر تحت القای IPTG بهینه‌سازی و به وسیله تکنیک SDS-PAGE و وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت. <br><b>نتایج:</b> قطعه کایمریک ctB-stxBدر وکتور بیانی pET28a(+) به وسیله توالی یابی، PCR و آنالیز آنزیمی تأیید گردید. همچنین پروتئین تولیدی به وسیله SDS-PAGE و وسترن بلات مورد تأیید قرار گرفت. <b><br>نتیجه گیری:</b> پروتئین نوترکیب تولیدی بعد از بررسی ایمنی زایی می تواند به عنوان کاندیدی برای واکسن مخاطی موثر و نوین علیه باکتری شیگلا دیسانتری تیپ 1 در نظر گرفته شود. </a></div> <a name="up"><b>Background and Objective:</b> Shiga toxin (STx) is the main virulence factor in Shigella Dysenteriae type I and is composed of an enzymatic subunit STxA monomer and a receptor-binding STxB homopentamer. Shigella toxin B subunit (STxB) is a non-toxic homopentameric protein responsible for toxin binding and internalization into target cells by interacting with glycolipid (Gb3). Cholera toxin B subunit (CTB) has been known as a mucosal adjuvant for vaccines and genetic fusions of CTB with several hetroantigens such as stxB and can increase humoral and mucosal immunity response.<br><b>Materials and Methods:</b> In this study, after primer designing, the ctxB and stxB genes were amplified by PCR and cloned into the pGEM-T vector. The stxB gene with a nonfurin linker was fused to the ctB gene in the pGEM vector via the restriction enzyme method and thereafter the fused genes of ctB-stxB were subcloned in the pET28a(+) as an expression vector. The expressed chimeric protein was induced with IPTG and evaluated via the SDS.PAGE and Western blot techniques. <br><b> Result:</b> The pET28a (+)/ctxB-stxB expression vector was confirmed by endonuclease digestion, PCR, and sequence analysis. The CTB-STB fusion protein was confirmed by the SDS-PAGE and Western-blot. <br> <b>Conclusion:</b> The CTB-STB recombinant protein can be used as a new and desirable mucosal vaccine for Shigella Dysenteriae type I.</a> شیگلا دیسانتری تیپ 1، STxB، CTB، ادجوانت، لینکر غیر فورینی. Adjuvant; CTB; Nonfurin linker; StxB; Shigella Dysenteriae type I 135 141 http://jabs.fums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-4&slc_lang=fa&sid=1 Hamid Madanchi حمید معدنچی hamidmadanchi@yahoo.com 10031947532846002409 10031947532846002409 Yes Hossein Honari حسین هنری Honari.hosein@gmail.com 10031947532846002410 10031947532846002410 No Sadegh Safaei صادق صفایی 10031947532846002411 10031947532846002411 No Ali Sayadmanesh علی صیادمنش Saiad7@yahoo.com 10031947532846002412 10031947532846002412 No