fa همسانه سازی، بررسی بیان و تخلیص ژن کد کننده پروتئین نوترکیب متشکل از زیرواحدهای اتصالی آنتی‌ژن‌های سطحی CS1 و CS2 از اشرشیا‌‌ کلی انتروتوکسیژنیک (ETEC) بیوتکنولوژی پزشکی Medical Biotechnology پژوهشي Research <strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">زمینه و هدف:</span></span></span></strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> باکتری <em>اشرشیا کلی</em> انتروتوکسیژنیک از عوامل شایع اسهال است. فاکتورهای کلونیزاسیون و انتروتوکسین‌ها از عوامل اصلی حدت زا در این ارگانیسم هستند. باکتری مذکور از طریق فاکتورهای کلونیزاسیون به سطح سلول‌های اپیتلیال روده متصل می‌شود و انتروتوکسین‌ها را تولید می‌کند که این سموم باعث ترشح بیش‌ازحد مایعات و الکترولیت‌ها در لومن روده می‌شوند که درنهایت منجر به اسهال می‌گردند. به دلیل درمان مشکل و شیوع بالای این بیماری طراحی واکسن علیه این ارگانیسم یکی از اهداف سازمان بهداشت جهانی است. </span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">پروتئین</span></span></span> <span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">CooD &ndash; CotD</span></span></span></span><em><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> به‌عنوان</span></span></span></em><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> زیر واحدهای رأسی </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">CS1</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> و </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">CS2</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> نقش مهمی را در اتصال باکتری به سلول‌های اپیتلیال روده ایفا می‌کنند. در این مطالعه بیان و تخلیص ژن کد کننده پ</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">روتئین کایمریک </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">CooD &ndash; CotD</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> به‌عنوان کاندیدای واکسن‌های زیرواحدی انجام شد.</span></span></span><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"></span></span></span></strong><br> <strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">مواد و روش‌ها: </span></span></span></strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">در</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">این</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">مطالعه‌،</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">بهینه‌سازی</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">کدونی</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">ژن کایمریک </span></span></span><em><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">cooD</span></span></span></span></em><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;"> &ndash; <em>cotD</em></span></span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">با</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">نرم‌افزار</span></span></span> <span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">Gene Designer </span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">انجام</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">شد. ژن موردنظر با روش </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">PCR</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> تکثیر و در وکتور کلونینگ</span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">pJET1.2/blunt </span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">&nbsp;همسانه سازی گردید و به‌منظور بیان در وکتور بیانی</span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">pET28a </span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">&nbsp;زیرهمسانه‌سازی شد. </span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">پروتئین با روش کروماتوگرافی نیکل تخلیص و با </span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">وسترن بلات</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> ارزیابی شد.</span></span></span><br> <strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">نتایج: </span></span></span></strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">حضور باند 82 کیلودالتونی در ژل </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">SDS-PAGE</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> 10 درصد بیان </span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">پروتئین کایمریک </span></span></span><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:times new roman,serif;"><span style="font-size:8.0pt;">CooD &ndash; CotD</span></span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> را نشان داد که با روش وسترن بلات تأیید گردید. میزان </span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">پروتئین</span></span></span> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">تخلیص شده در این تحقیق</span></span></span><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> 121 میکروگرم در میلی‌لیتر بود.</span></span></span><br> <strong><span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">نتیجه‌گیری:</span></span></span></strong> <span style="color:black;"><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">مطالعات بیان و تخلیص پروتئین نشان داد که این پروتئین دارای بیان در میزبان همولوگ است.</span></span></span><br> <br> &nbsp; <strong><em>Background & Objective:</em></strong> Enterotoxigenic <em>Escherichia coli</em> (ETEC) is a major causative agent of diarrhea. Enterotoxins and the colonization factors (CFs) are major virulence factors in ETEC infections. The bacterium binds to the intestinal epithelial cell surface through colonization factors and produces enterotoxins that cause excessive fluid and electrolyte secretion in the lumen of the intestine, which ultimately leads to diarrhea<span dir="RTL">.</span> Due to the difficult of treatment and the high prevalence of this disease, the design of the vaccine against this organism is one of the goals of the World Health Organization. The CooD-CotD protein, as adhesion tip subunits of CS1 and CS2, plays an important role in bacterial attachment to the intestinal epithelial cells. In this study, the expression and purification of chimeric protein CooD-CotD was carried out with the aim of investigating as candidate vaccine.<br> <strong><em>Materials & Methods:</em></strong> In this study, codon optimization of <em>cooD-cotD</em> chimeric gene was performed by Gene Designer software. The gene was amplified by PCR and cloned into pJET1.2 / blunt then it was subcloned into pET28a to express chimeric protein. Recombinant protein was purified following expression, using Ni-NTA affinity chromatography and confirmed by western blotting analysis.<br> <strong><em>Result</em></strong><strong>s:</strong> The presence of 82kDa in the SDS-PAGE gel showed that expression of CooD-CotD chimeric protein and confirmed by western blotting analysis. Yield of purified protein was 121 mg/ml.<span dir="RTL"></span><br> <strong><em>Conclusions:</em></strong> Expression and protein purification studies showed that this protein has expression in the homologous host. انتروتوکسیژنیک اشرشیا‌ کلی, CS1, CS2, بیان نوترکیب Enterotoxigenic Escherichia coli, CS1, CS2, Recombinant expression 1025 1035 http://jabs.fums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-820-2&slc_lang=fa&sid=1 Dorna Khoobbakht درنا خوب بخت dorna.khoobbakht@yahoo.com 100319475328460018997 100319475328460018997 No Department of Genetics, Faculty of Basic Sciences, Islamic Azad University, Research Branch, Tehran, Iran گروه ژنتیک، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم تحقیقات تهران، ایران Jafar Amani جعفر امانی jafar.amani@gmail.com 100319475328460018998 100319475328460018998 Yes Applied Microbiology Research Center, Systems Biology and Poisonings Institute, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، انستیتو سیستم بیولوژی و مسمومیت‌ها، دانشگاه علوم پزشکی بقیه‌الله (عج)، تهران، ایران Shohreh Zare شهره زارع shohrehzare@yahoo.com 100319475328460018999 100319475328460018999 No Department of Genetics and Biotechnology, School of Biological Science, Varamin-Pishva, Branch Islamic Azad University, Varamin, Iran گروه ژنتیک و بیوتکنولوژی، دانشکده علوم زیستی پیشوا، دانشگاه آزاد اسلامی واحد ورامین، ایران Zahra Nourmohammadi زهرا نورمحمدی marjannm@yahoo.com 100319475328460019000 100319475328460019000 No Department of Genetics, Faculty of Basic Sciences, Islamic Azad University, Research Branch, Tehran, Iran گروه ژنتیک، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم تحقیقات تهران، ایران