fa بهینه‌سازی کدون ژن فاکتور سلول‌های بنیادی (SCF) و ارزیابی بیان این ژن با کمک وکتور pBudCE4.1 در سلول‌های تخمدان همستر چینی (CHO) بيولوژي سلولی-مولكولي Cellular-Molecular Biology پژوهشي Research <p dir="RTL"><strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">زمینه و هدف</span></span></strong><strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">:</span></span></strong> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">فاکتور سلول بنیادی (</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">SCF</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">) یک سایتوکاین خونی است که می‌تواند از طریق تأثیر بر روی سلول‌های مولد خون‌ساز در تمایز سلول‌های پیش‌ساز خونی، بقاء، تکثیر و تمایز ماست سل‌ها و همچنین افزایش تکثیر و تهاجم سلول‌های توموری بااهمیت باشد و نقش درمانی آن در بهبود بیماری‌هایی نظیر آلزایمر و سکته‌های قلبی در حال بررسی و تحقیق است. هدف از این تحقیق کلون‌سازی ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">SCF</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> به‌وسیله حامل بیانی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">pBudCE4.1</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> با بهینه‌سازی کدون در سلول‌های تخمدان همستر چینی (</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">CHO</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">) بود</span></span><strong><em><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">.</span></span></em></strong><br> <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">مواد و روش‌ها:</span></span></strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> در این مطالعه تجربی </span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">توالی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">SCF</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> بعد از بهینه‌سازی کدون برای سلول‌های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">CHO</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> و تغییر دادن محتوی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">G+C</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> به میزان بهینه</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">به‌صورت سنتتیک ساخته شد و </span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">در</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> وکتور بیانی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">pBudCE4.1</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> ساب کلون شد. </span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">سپس</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">SCF</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> به همراه پلاسمید موردنظر به درون سلول‌های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">CHO-K1</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> ترانسفکت شد و با استفاده از </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">RT qPCR</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> میزان بیان ارزیابی گردید.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">نتایج: </span></span></strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">حامل بیانی نوترکیب </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">pBudCE4.1/SCF</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> ساخته شد و با تکنیک </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">PCR</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">، هضم آنزیمی و تعیین توالی مورد تائید قرار گرفت. نتایج </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">RT qPCR</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> نشان داد که ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">SCF</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">پس از بهینه‌سازی کدون </span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">در سلول‌های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">CHO</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> می‌تواند بیان شود.</span></span><br> <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">نتیجه‌گیری<em>:</em> </span></span></strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">نتایج نشان داد که به‌خوبی می‌توان نسبت به همسانه‌سازی ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">SCF</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> از طریق حامل بیانی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">pBudCE4.1</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> اقدام کرد و </span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">این حامل بیانی می‌تواند یک حامل مناسب برای بیان ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">SCF</span></span><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;"> در سلول‌های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">CHO</span></span> <span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">باشد.</span></span><br> &nbsp;<br> &nbsp;</p> <p><strong>Background & Objective<em>:</em></strong> Stem cell factor (SCF) is a blood cytokine which can play a significant role in the differentiation of blood precursor cells, survival, proliferation and differentiation of mast cells, and it can also increase the proliferation and invasion of tumor cells through affecting hematopoietic cells. Its therapeutic effect in the treatment of diseases such as Alzheimer&#39;s and myocardial infarction is being investigated. The aim of this study was to clone SCF gene into the pBudCE4.1 expression vector by codon optimization in Chinese hamster ovary cells (CHO).<br> <strong>Materials & Methods:</strong> In this experimental study, SCF sequence was made synthetically after codon optimization for CHO cells and changing of the contents of G+C and subcloned into the expression vector pBudCE4.1. Then, SCF gene was transfected into CHO-K1 cells and evaluated using RT<em>-</em>qPCR for gene expression of the relevant gene.<br> <strong>Results<em>:</em></strong> Recombinant expression vector pBudCE4.1/SCF was constructed and approved by PCR technique, enzyme digestion and sequencing. RT and PCR results showed that SCF genes can be expressed in CHO cells after codon optimization.<br> <strong>Conclusion:</strong> The results showed that the cloning of SCF gene can be done well through expression vector pBudCE4.1 and this expression vector can be an appropriate vector for expressing SCF gene into CHO cells.<br> &nbsp;</p> بهینه‌سازی کدون, فاکتور سلول بنیادی (SCF), سلول‌های تخمدان همستر چینی (CHO) کلونینگ Codon optimization, Cloning, Chinese Hamster Ovary Cells (CHO), Stem Cell Factor (SCF) 223 232 http://jabs.fums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-545-2&slc_lang=fa&sid=1 Ehsan Heidari احسان حیدری سورشجانی ehsanheidari2012@yahoo.com 100319475328460017881 100319475328460017881 No Department of Biology, Faculty of Basic Sciences, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Sahrekord, Iran گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران Maryam Peymai مریم پیمانی m.peymani62@gmail.com 100319475328460017882 100319475328460017882 Yes Department of Chemistry, Faculty of Basic Sciences, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Sahrekord, Iran گروه زیستشناسی، دانشکده علوم پایه، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسالمی، شهرکرد، ایران Ali Kazemi علی کاظمی بابا حیدری kazemibali@gmail.com 100319475328460017883 100319475328460017883 No Department of Chemistry, Faculty of Basic Sciences, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Sahrekord, Iran گروه شیمی، دانشکده علوم پایه، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسالمی، شهرکرد، ایران Kamran Ghaedi کامران قائدی sansabel51@gmail.com 100319475328460017884 100319475328460017884 No Department of Cellular Biotechnology at Cell Science Research Center, Royan Institute for Biotechnology, ACECR, Isfahan, Iran گروه زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه اصفهان، اصفهان، ایران. گروه بیوتکنولوژی سلولی، مرکز تحقیقات سلولی، مرکز علمی آموزشی، کشت و تحقیق ، موسسه بیوتکنولوژی رویان، اصفهان، ایران