fa کلون کردن اپی توپ های خطی تحریک کننده ی لنفوسیت T آنتی ژن EG95 اکینوکوکوس گرانولوزوس در وکتور pGEX4t1 و بررسی بیان آن با روش SDS-PAGE ايمونولوژي Immunology پژوهشي Research <p dir="RTL"><strong>زمینه و هدف:</strong> انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس عامل بیماری مشترک بین انسان و دام به نام کیست هیداتیک یا هیداتیدوزیس است؛ موفق&shy;ترین واکسن نوترکیب علیه این بیماری از کلون کردن ژن کد کننده آنتی&shy;ژن 25 کیلو دالتونی آن یعنی <span dir="LTR">EG95</span> در وکتور <span dir="LTR">pGEX</span> می&shy;باشد که ایمنی سلولی و همورال قابل‌توجهی را در گوسفندان ایجاد کرده است اما با توجه به نقش ایمنی سلولی <span dir="LTR">TH1</span> در غلبه بر این بیماری و نقش اپی&shy;توپ&shy;های خطی در تحریک این نوع سیستم ایمنی جهت بهینه‌سازی شرایط واکسن موجود در مطالعه حاضر تنها توالی کد کننده اپی&shy;توپ&shy;های خطی تحریک‌کننده لنفوسیت <span dir="LTR">T</span> این آنتی&shy;ژن کلون و بیان شد.</p> <p dir="RTL"><strong>مواد و روش&shy;ها:</strong> با استفاده از نرم‌افزار <span dir="LTR">IEDB</span> توالی کد کننده‌ی اپی&shy;توپ&shy;های خطی آنتی&shy;ژن <span dir="LTR">EG95</span> پیش&shy;بینی و سنتز شد. تکثیر قطعه موردنظر با <span dir="LTR">PCR</span> انجام و بعد از هضم آنزیمی آن و وکتور <span dir="LTR">pGEX4T1</span> با آنزیم <em><span dir="LTR">xhoI</span></em><em>،</em> در وکتور با روش شوک حرارتی کلون گردید. کلونی&shy;های مثبت با روش <span dir="LTR">colony PCR</span> با استفاده از پرایمرهای مختلف انتخاب‌شده و بیان پروتئین نوترکیب در سلول <span dir="LTR">BL21</span> با <span dir="LTR">10%SDS-PAGE</span> موردبررسی قرار گرفت.</p> <p dir="RTL"><strong>نتایج:</strong> تکثیر توالی کد کننده اپی&shy;توپ&shy;های <span dir="LTR">EG95 </span>با <span dir="LTR">PCR</span> انجام و قطعه موردنظر در وکتور <span dir="LTR">pGEX4T1</span> کلون گردید. تأیید پلاسمید نوترکیب با <span dir="LTR">colony</span> <span dir="LTR">PCR</span> و اختلاف اندازه وکتور طبیعی و نوترکیب صورت گرفت. بیان پروتئین نوترکیب آنتی&shy;ژن نیز به‌وضوح با <span dir="LTR">SDS-PAGE</span> مشخص شد.</p> <p dir="RTL"><strong>نتیجه&shy; گیری: </strong>قطعه <span dir="LTR">EG95</span> به‌طور موفقیت&shy;آمیزی در وکتور <span dir="LTR">pGEX4T1</span> کلون و در سلول <span dir="LTR">BL21</span> بیان شد.</p> <p><strong><em>Background & Objectives:</em></strong><em> Echinococcus granulosus</em> causes a common disease between humans and animals that called hydatid cyst or hydatidosis. The recombinant EG95 vaccine based on cloning of the 25 KD oncospheral antigen-Eg95- in pGEX stimulated significant humoral and cellular immunity in sheep, but regarding the effect of TH1cell immunity against this parasite and the influence of the linear T-cell epitopes in stimulating this immunity, only the coding sequence of linear T Cell epitopes of EG95 was cloned in pGEX and analyzed it&#39;s expression to optimize the qualification of this available vaccine in this study.</p> <p><strong><em>Materials & Methods:</em></strong> The coding sequence of EG95 linear epitopes by IEDB software were predicted and synthesized. After PCR, the amplicon and pGEX4T1 were digested by <em>xhoI</em> restriction enzyme, the fragment was cloned into pGEX4T1 by heat shock method, and Positive colonies were selected by direct PCR with specific primers. The recombinant protein expression was evaluated in BL21 cells by 10% SDS-PAGE.</p> <p><strong><em>Results: </em></strong>The coding sequence of EG95 linear T-cell epitopes was amplified by PCR and cloned into pGEX4T1 vector.&nbsp; The recombinant plasmid was selected with Colony PCR and size difference between intact and recombinant purificated vectors. Recombinant protein expression with high significant concentration was recognized by SDS-PAGE.</p> <p><strong><em>Conclusion:</em></strong> The EG95 linear T-cell epitopes coding sequence has been successfully cloned into pGEX4T1 vector and expressed into BL21 cells.</p> واکسن های اپی توپی, لنفوسیت T, آنتی ژن EG95, کیست هیداتیک EG95 antigen, Epitope vaccine, Hydatid cyst, T lymphocyte 311 318 http://jabs.fums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1183-1&slc_lang=fa&sid=1 Roghayeh Mesri رقیه مصری 100319475328460011078 100319475328460011078 No Department of Cellular & Molecular, Faculty of Biological Sciences, Kharazmi University, Tehran, Iran. گروه آموزشی سلولی و مولکولی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه خوارزمی، تهران، ایران Majid Esmaelizad مجید اسمعیلی زاد m.esmaelizad@rvs 100319475328460011079 100319475328460011079 Yes Central lab, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran. بخش آزمایشگاه مرکزی، مؤسسه تحقیقاتی واکسن و سرم‌سازی رازی، کرج، ایران Mmozhghan Ahmadzadeh مژگان احمدزاده 100319475328460011080 100319475328460011080 No Department of Cellular & Molecular, Faculty of Biological Sciences, Kharazmi University, Tehran, Iran. گروه آموزشی سلولی و مولکولی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه خوارزمی، تهران، ایران Somayeh Mohammadi سمیه محمدی 100319475328460011081 100319475328460011081 No Department of Cellular & Molecular, Faculty of Biological Sciences, Kharazmi University, Tehran, Iran. گروه آموزشی سلولی و مولکولی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه خوارزمی، تهران، ایران Seyed Abdolhamid Angaji سید عبدالحمید انگجی 100319475328460011082 100319475328460011082 No Department of Cellular & Molecular, Faculty of Biological Sciences, Kharazmi University, Tehran, Iran. گروه آموزشی سلولی و مولکولی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه خوارزمی، تهران، ایران Zahra Yazdanpour زهرا یزدان پور 100319475328460011083 100319475328460011083 No Central lab, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran. بخش آزمایشگاه مرکزی، مؤسسه تحقیقاتی واکسن و سرم‌سازی رازی، کرج، ایران Seyedeh Fahimeh Mmir Haghghouy Jali سیده فهیمه میر حقگوی جلالی 100319475328460011084 100319475328460011084 No Central lab, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran. بخش آزمایشگاه مرکزی، مؤسسه تحقیقاتی واکسن و سرم‌سازی رازی، کرج، ایران